引言：
科研人员采用了抑制减法杂交的方法，来阐明卷心菜感染黄单胞菌后引发黑腐病原体抗性的机制，他们选择了卷心菜抗性品种Pusa mukta，并构建了一个富含差异表达转录本的cDNA文库。
目前的研究结果显示，在所研究的单基因中，与防御相关的单基因占总数的35%，科研人员通过半定量RT-PCR确认了与防御特异性相关的基因，并揭示了这些基因在抗性品种中的表达增加，不过问题在于，抗性品种在受到黑腐病细菌病原体攻击时，会引发强烈的超敏反应。
2024年10月20日
科研人员采用了抑制减法杂交的方法，来阐明卷心菜感染黄单胞菌后引发黑腐病原体抗性的机制，他们选择了卷心菜抗性品种Pusa mukta，并构建了一个富含差异表达转录本的cDNA文库。
目前的研究结果显示，在所研究的单基因中，与防御相关的单基因占总数的35%，科研人员通过半定量RT-PCR确认了与防御特异性相关的基因，并揭示了这些基因在抗性品种中的表达增加，不过问题在于，抗性品种在受到黑腐病细菌病原体攻击时，会引发强烈的超敏反应。
2024年10月20日
PCR — 聚合酶链式反应
优点：方法操作简单，反应快速敏捷，结果可靠
原理：与细胞内发生的DNA复制过程十分相似。
是在模板、引物和4种dNTP（包含A、T、C、G四种碱基的脱氧核苷酸）存在条件下，依赖于DNA聚合酶体外扩增目的DNA的反应。
2024年10月20日
有个同学问，他表格中有一条DNA，其中一条的碱基序列，如ATTAGACC....如何快速将它的另外一条序列计算出来呢？
那首先我们要拿起初中生物学的关于基因的知识，两个序列是一一对应的，对应关系是A-T，C-G，也就是说，ATTAGACC...，对应的碱基序列应该是TAATCTGG...
这是在基因中的正好对应，碰到这种类似的经典问题，那如何在Excel中快速的计算?大家集思广益，小编这里提供两种解决思路的方法。
第一种思路，先分列，再合并
2024年10月20日
张俊海，解放军306医院，神经外科
1989 年，Janeway 提出了病原体和宿主先天性免疫防御之间存在分子模式识别受体(patternrecognitionreceptor, PRR) 的假说.
研究显示，作为炎症反应的中心环节，炎性小体与很多疾病密切相关。其中，与NLRP3 炎性小体相关疾病较多。首先是遗传性疾病。最初发现与炎性小体相关的疾病是穆- 韦氏综合征，属Cryopyrin蛋白相关综合征，主要因基因突变导致NLRP3 炎症小体过度激活，产生过量的IL-1β。临床上使用IL-1β 抑制剂能缓解穆- 韦氏综合征患者的症状。其次是炎性疾病。一些晶体包括二氧化硅、石棉等也通过NLRP3 炎性小体来诱发肺部炎症反应。现有研究结果认为，急性肺损伤发生发展的重要因素之一是过度失调的炎症反应。同样，IL-1β 的靶向治疗能够缓解痛风和关节炎等疾病，提示炎性小体与该疾病也有关联，这在Martinon等 的研究中得到了证实。再次是一些慢性疾病。关于2 型糖尿病与炎性小体之间的关系，牵涉NLR的论据第一次由Tschopp 实验室提出，nlrp3 敲除的小鼠高脂饮食8 周后比野生型小鼠糖耐量更高，对胰岛素更敏感。Latz 实验室的工作表明，动脉粥样硬化的形成和NLRP3 炎性小体的激活有关。另一方面，阿尔兹海默病的淀粉样斑块、肌萎缩侧索硬化症中突变的SOD1、老年性黄斑变性中的玻璃膜疣以及相关疾病中的朊病毒 都可以激活NLRP3 炎性小体，但目前没有证据显示IL-1β或者IL-18 抑制剂对患者有益。Nlrp1 基因突变的小鼠，其祖细胞的死亡率明显增加，由于祖细胞在受到感染或者化疗时具有易感性，最终可以导致血细胞减少症。此外，nlrp1 基因突变也可以引发黑色素细胞功能异常所导致的白癜风。炎性小体对肿瘤的发生发展也有一定作用。Dinarello 指出，IL-1 能够介导趋化因子、基质金属蛋白酶、黏附因子等促进肿瘤转移的蛋白的表达，加速肿瘤的发展；在小鼠炎性肠病模型中，IL-18 的抑制剂能够减少肿瘤的发生率。在NLRs 家族蛋白中，NLRP3、NLRP6 和NLRC4 对结肠炎起作用，并且可以影响肿瘤的发生率。炎性小体也牵涉其他的癌症，包括皮肤癌和骨髓瘤，虽然还不知道是哪种炎性小体参与，但是在有些临床试验中，靶向IL-1 的治疗对皮肤癌和骨髓瘤是有益的。
2024年10月20日
利用某种生物的总mRNA合成cDNA，再将这些cDNA与载体连接，转入细菌细胞中进行保存和扩增，称cDNA文库。cDNA 文库不同于基因组文库，被克隆的 DNA 是从 mRNA 反转录来源的DNA，组成特点是其中不含有内含子和其他调控序列，因此进行 cDNA 克隆时应先从获得 mRNA开始，在此基础上，通过反转录酶作用产生一条与 mRNA 相互补的 DNA 链，然后除掉mRNA，以第一条 DNA 链为模板复制出第二条 DNA 链（双链）；再进一步把此双链插入原核或真核载体。
2024年10月20日
二十一、抑制差减杂交
是由Diatchenko等建立的以抑制性PCR和DNA差减杂交方法相结合的方法。
依据的主要技术有两点：(1)消减杂交；(2)抑制PCR。经抑制差减杂交后的cDNA群体不仅富集了差异表达基因(目的基因)，而且目的基因间丰度的差异经过均等化作用已基本消除，使消减后的cDNA群体为丰度一致的目的基因群体。
2024年10月20日
转录组测序技术发展至今，已经从一代、二代的短读长，发展到对单个分子边合成边测序，获得超长读长的三代测序。做三代测序最强的公司之一，PacBio，于2019年又再度升级技术，推出了high-fidelity（HiFi）reads。
没错，就是声音还原度超高的那个HiFi，不过Pacbio是高度还原了转录本，在CCS的测序模式下，既保证了长度长又提升了测序序列的准确性。
2024年10月20日
PCR扩增DNA时，怎么保证分开的双链就与引物结合
问题：PCR扩增DNA时，降温复性是让引物与分开的双链结合，这时怎么保证分开的双链就与引物结合而不是原来的两条母连彼此重新结合？
解释：原因有两个：
1.完全解链的两条母链自动复性需要时间长，需要10小时以上才能复性完全。